腺病毒包装

腺病毒包装中的难点主要在于怎么将外源基因表达框或者外源的shRNA表达框构建至腺病毒骨架载体上。由于腺病毒骨架载体比较大(>30kb),而且载体中的一些常用酶切位点几乎都有多个,如果用常规的酶切-连接的方式将外源基因或者shRNA表达框构建至腺病毒骨架载体上,成功率很低,因此,目前的腺病毒表达系统基本上都是用同源重组的方法将外源基因或shRNA表达框构建至腺病毒骨架载体上。

本公司的腺病毒包装出自Invitrogen公司的BLOCK-iT™ Adenoviral Expression System,与市面上其它腺病毒包装往往利用大肠杆菌或者293细胞自身的同源重组系统不同,本公司的腺病毒表达系统采用的是Invitrogen公司的Gateway技术,即利用LR重组酶进行体外重组。与其它腺病毒表达系统相比,这种体外重组更加方便、快速,重组效率更高!此外,本公司对这套腺病毒表达系统多个部分进行了优化和改造,使得整套系统适用范围更广,鉴定更方便、准确,病毒构建及包装更快捷。

图3. 1 腺病毒骨架载体pAd/BL-DEST质粒图谱

腺病毒骨架载体pAd/BL-DEST质粒图谱

图3. 2 腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-4 (表达基因用)质粒图谱

腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-4(表达基因用)质粒图谱

图3. 3 腺病毒穿梭载体pYr-1.1(表达shRNA用)质粒图谱

腺病毒穿梭载体pYr-1.1(表达shRNA用)质粒图谱

赢润生物腺病毒包装系统--穿梭载体简介

穿梭载体名称 穿梭载体特点
表达shRNA用
pYr-1.1 hU6启动子;EGFP荧光标记
pYr-1.2 mU6启动子;EGFP荧光标记
pYr-1.3 hH1启动子;EGFP荧光标记
pYr-1.4 h7SK启动子;EGFP荧光标记
pYr-2.1 hU6启动子;无荧光标记
pYr-2.2 mU6启动子;无荧光标记
pYr-2.3 hH1启动子;无荧光标记
pYr-2.4 h7SK启动子;无荧光标记
表达mirshRNA用
pYr-mir30-shRNA CMV启动子;micro30双臂,EGFP荧光标记
表达基因用
pYr-adshuttle-1 CMV启动子;无荧光标记
pYr-adshuttle-2 CMV启动子;EGFP荧光标记,融合表达用
pYr-adshuttle-3 CMV、hEF1α双启动子,可同时表达两个基因
pYr-adshuttle-4 CMV、hEF1α双启动子;hEF1α启动子后插入EGFP荧光基因,CMV启动子后空着
pYr-adshuttle-5 CMV启动子;RFP荧光标记,融合表达用
pYr-adshuttle-6 CMV启动子;外源基因-IRES-EGFP形式
pYr-adshuttle-7 CMV、hEF1α双启动子;CMV启动子后插入EGFP荧光基因,hEF1α启动子后空着

腺病毒包装服务价格及周期(S4011):

项目 价格 周期
表达shRNA重组腺病毒包装(1010pfu/ml滴度)
表达shRNA 重组腺病毒包装 5000元 4~5周
表达mirshRNA重组腺病毒包装(1010pfu/ml滴度)
表达mirshRNA 重组腺病毒包装 5000元 4~5周
基因过表达重组腺病毒包装(1010pfu/ml滴度)
目的基因在1.5k以内 5000元 4~5周
目的基因在1.5k~2k 5500元 4~5周
目的基因在2k~2.5k 6000元 4~5周
目的基因在2.5k~3k 6500元 4~6周
目的基因大于3k 询价 4~6周
1010pfu/ml滴度,超过1ml
1010pfu/ml滴度,超过1ml 1000元/ml 1~2周
腺病毒浓缩及纯化(1011pfu/ml滴度)
表达shRNA重组腺病毒 10000元/ml 3~4周
表达mirshRNA重组腺病毒 10000元/ml 3~4周
基因过表达重组腺病毒 14000元/ml 3~4周
腺病毒对照(1010pfu/ml滴度)
rAd-NC-shRNA 1000元/ml 1~2周
rAd-EGFP 1000元/ml 1~2周
rAd-RFP 1000元/ml 1~2周
rAd-Null 1000元/ml 1~2周
腺病毒对照(1011pfu/ml滴度)
rAd-NC-shRNA 7000元/ml 3~4周
rAd-EGFP 7000元/ml 3~4周
rAd-RFP 7000元/ml 3~4周
rAd-Null 7000元/ml 3~4周

客户须知:

  1. 腺病毒的感染依赖于细胞表面的柯萨奇-腺病毒受体(CAR),虽然其可以感染多种宿主及大量的细胞株/系,仍有少量细胞因其表达不带该受体而无法进行有效感染,客户在确定是否采用重组腺病毒之前请先通过阅读文献或是预实验来确定实验的目标基细胞可被腺病毒感染。
  2. 本公司目前不提供致癌基因及毒基因等对人体有危害的基因的包装服务。
  3. 如客户所需包装的目的基因或shRNA序列由客户提供,则客户应提供所要构建腺病毒的目的基因/shRNA的序列及其它相关说明信息。客户应对所提供的材料及信息负责,如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
  4. 外源shRNA片段及基因片段构建至穿梭载体的实验费用另外计算,详情可参见“shRNA表达载体构建”、“基因克隆”等服务项目。
  5. 咨询邮箱:yrbio@cf-zuche.com